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美國紡織印染師協會標準
AATCC 100-2004抗菌整理織物的評價

1. 目的和范圍
1.1 本方法提供了抗菌性能定量評價的操作程序。抗菌整理織物的評價取決于所使用材料抗菌性能。若材料僅有抑菌性能（抑制細菌繁殖），則采用抗菌處理和無抗菌處理的樣品相比較的定性方法AATCC147即可。若材料具有或應用殺菌性能，則還須進行定量評價。定量檢測可為抗菌整理織物及材料的應用提供更為明確的藍圖。

2. 原則
2.1 首先采用AATCC 147對試驗樣品和對照樣品進行定性的抗菌性能試驗。若呈現抗菌性能則可進行定量試驗。對試驗樣和對照樣接種試驗菌，培養后，加入定量的中和液采用振蕩方式將試片中細菌洗脫出。對洗出液進行活菌計數，計算試驗樣的細菌減少率。

3. 術語
3.1 （抗菌劑的）活性：抗菌劑抗菌性能的量度。
3.2 抗菌劑：指能殺死細菌或影響細菌繁殖、生長以及活性（抑菌劑）的化學物質。

4. 安全措施
注意：本安全措施僅提供相應的信息，是試驗輔助環節，并非必備程序。用本方法試驗時，用戶有責任采用安全、恰當的技術來處理材料。必須向生產商咨詢諸如材料的安全性數據和其他推薦之類的特殊細節。必須咨詢并遵循OSHA（職業安全和衛生管理局）的標準及規則。
4.1 開展定性試驗和定量試驗均必須是經過微生物操作培訓和有技術經驗的人。必須咨詢并遵循美國健康和公益產業部的《微生物學和生物醫學實驗室安全規范》執行。
4.2 警告：試驗中的某些微生物能傳染給人類并引發疾病。因此試驗及相關人員必須采取合理的保護措施，避免傷害。穿防護服和戴防毒面罩來避免細菌的感染。
4.3 養成良好的試驗習慣，在實驗區內佩戴防護鏡。
4.4 小心取用所有的化學藥品。
4.5 洗眼的藥水和安全性淋浴應就近放置以備緊急使用。
4.6 試驗前，對所有有可能受污染的樣品和材料進行滅菌。
4.7 暴露在試驗所用化學試劑的劑量應控制在或低于政府機構設立的標準（如OSHA規定的暴露極限[PEL]，參考1989年1月1日的1910.1000CFR的29。）此外，推薦采用下列規范作為暴露于氣體污染物的一般性指導：美國政府企業衛生專家大會（ACGIH）的閾限值（TLV），包括時間加權平均閾限值（TLV-TWA）和短時間接觸閾限值（TLV-STEL），上限值（TLC-C）等。

5．限制
5.1 定性試驗是相對快捷、方便測定織物殘余抗菌性能的方法，可參考AATCC 147織物抗菌性能評價：平行劃線法。

6．試驗菌種
6.1 試驗細菌
6.1.1 金黃色葡萄球菌 ATCC 6538 革蘭氏陽性菌
6.1.2 肺炎克雷伯氏菌 ATCC 4352 革蘭氏陰性菌
6.1.3 也可根據需要或用途選用其他菌種

7．培養基
7.1 適宜的肉湯/瓊脂培養基由營養物質、大豆蛋白和腦心浸液（肉湯）組成
營養肉湯：
蛋白胨（細菌蛋白）        5g
牛肉浸膏                            3g
蒸餾水                                1000ml
7.2 加熱至沸騰以促進溶解分散，用1mol /L NaOH或更低濃度溶液調節pH=6.8±0.1(若采用脫水培養基成品直接配制，則不需要此步)。
7.3 量取10ml加入到常規細菌培養管（125×17mm），具塞后并在121℃、103kPa（15psi）的壓力下滅菌15分鐘。
7.4 營養瓊脂：加1.5%細菌用瓊脂到營養肉湯中，加熱至沸騰。用氫氧化鈉溶液調節pH=7.1±0.1。取15±1ml放入常規細菌培養管，塞上塞子并在103kPa的壓力滅菌15分鐘（也可用1000ml硼硅酸鹽燒瓶裝來滅菌，然后從燒瓶中將其倒入培養皿）。
7.5 漿狀接種物（用于疏水性織物）：
氯化鈉                    8.5g
瓊脂                        3.0g
蒸餾水                    1000ml

8. 試驗菌的保藏
8.1 用直徑為4mm接種環將菌株轉接到營養肉湯中，每天連續轉接不超過2周（即14代以內，用3～14代細菌進行實驗）。2周后，重新從保藏菌株上進行轉接，在37±2℃（或其它適宜溫度）下培養。
8.2 在營養瓊脂或適宜的瓊脂斜面上保藏細菌，在5±1℃下保藏，并1個月轉接一次。

9．定性試驗（推斷性試驗）
9.1 用AATCC 147和上文的試驗菌株來評價試驗樣和對照樣的抑菌性能。若發現材料有明顯的抗菌作用，則驗證其殺菌性能，需繼續進行下文的定量試驗。

10定量試驗（確定性試驗）
10.1 樣片制備 以下描述均指織物樣品。對于無紡布，需對本法進行適當修正，再進行試驗。
10.1.1 樣片的尺寸和形狀：將樣品裁剪成直徑為4.8±0.1cm（1.9±0.03英寸）圓片，將這些樣片置于250ml帶蓋的廣口玻璃錐瓶中。樣片數量取決于材料種類和織物結構，以剛能吸收1.0±0.1ml菌液為標準。如約4片棉布可吸入1ml，每瓶用的樣片數須在報告中注明。
10.1.2 對照樣 與試驗樣片同材質但沒有進行抗菌整理。（陰性控制）
10.1.3 樣片滅菌 本步驟為可選。滅菌方法取決于織物種類和整理方法。棉布、醋酸纖維和很多人造纖維都可用高壓法滅菌，羊毛可用環氧乙烷滅菌或間歇蒸汽滅菌。間歇蒸汽滅菌也是對某些抗菌處理損害較小的方法。如使用了滅菌方法，則須在報告中注明滅菌方式。
10.1.4 每個樣品平的接種菌液量：取1.0±0.1ml一定濃度的菌液（把24小時肉湯培養物稀釋得到）滴加到每個樣品上，以保證每個對照樣和抗菌試樣0接觸時間的回收活菌數為1～2×105cfu，稀釋菌液必須采用營養肉湯。
10.2 試驗操作
10.2.1 樣片的接種 若使用金黃色葡萄球菌，在配制接種液前對24小時培養物充分振蕩，靜置15～20分鐘。將樣片分別放于滅菌的培養皿中，然后用微量移液器將稀釋后的菌液均勻接種到樣片上。將這些樣片在無菌狀態下轉移到廣口瓶中，蓋緊瓶蓋以防蒸發。
10.2.2 接種后（0接觸時間）盡快向對照樣、抗菌樣以及未接種的瓶中加入100±1ml中和液。
10.2.3 中和液應包括中和特定抗菌整理的組分，注意部分織物的PH值要求。記錄所用中和液。
10.2.4 充分振蕩1分鐘，洗脫液用水進行適當的梯度稀釋，并將每次稀釋后的溶液接種到2份營養瓊脂上。稀釋倍數通常為100 、101、102。
10.2.5 一定時間的接觸培養。將其余未稀釋的含有接種對照樣和抗菌樣的小瓶在37±2℃條件下培養18～24小時。類似的，也可進行其他時間（如1小時、6小時）的培養，來測定這些時間的殺菌效果。
10.2.6 接種培養后樣片的計數 培養后，分別在對照樣和抗菌樣的瓶中加入100±1ml中和液，振蕩1分鐘，用水進行適當倍數的梯度稀釋，并將每次稀釋后的溶液接種到2份營養瓊脂上。稀釋倍數通常為100 、101、102。對抗菌樣片，可能需要其他的稀釋倍數。
10.2.7 在37±2℃（或其它適宜溫度下）對各培養皿進行24～48小時培養。

11．評價
11.1 報告每片樣品的細菌數，如經100稀釋度培養得到的細菌數為“0”，則記錄為“＜100”。
11.2 根據下式計算抗菌樣片的細菌減少率。
（1）R（％）＝100（B-A）/B
其中：
R--細菌減少率（%）
A--一定時間培養后的抗菌樣的菌落數
B--0接觸時間抗菌樣的菌落數
（2）R（％）＝100（C-A）/C
其中：
C--0接觸時間對照樣的菌落數
如B和C相差很大，則取其中大的值。如B,C相差不大，則采用下式進行計算：
（3）R（％）＝100（D-A）/D
其中：D＝(B+C)/2
11.3 如不能得到未處理樣品，則利用下式計算，該式考慮了對試驗產生干擾作用的各種微生物的作用
Bg（%）=100[]
其中：
E-- 未接種抗菌樣的活菌數（存在的背景細菌）
F-- 未接種、預濕處理的抗菌樣在培養一段時間后的活菌數（培養后的背景活菌數）
Bg-- 背景微生物
11.4 試驗有效的條件：應同時滿足（1）和（2）。
（1）未接種試樣上的活菌數為0；
（2）接種培養后對照樣上的活菌數明顯高于0時間細菌數。此點僅適合于用營養肉湯作為稀釋液的情況。
11.5 報告抗菌樣品對各細菌的減少百分率。
11.6 是否符合標準由相關單位決定
11.7 在報告中注明稀釋液的情況

12 精度和偏差
研究（見13.9）表明在實驗室內測試用標準培養基計算（SPC）的精確度如下：
（a）不同試驗人員之間測試結果允許偏差為18%。
（b）同一試驗人員之間測試結果允許偏差為8%。
13 參考文獻及注釋
13.1 美國健康部和民政局CDCNIHHS 出版社出版物。第84—8395號。（CDC）
13.2 國家局出版手冊 AGGIH Kemper Woods中心，1330
Kemper Meadow 辛辛那提 博士 45240 電話：5131742—2020
13.3抗菌蛋白胨由Difco實驗室提供，920 圣·亨利博士 底特律 MI48201。
13.4牛肉提取物巴爾的摩生物實驗室提供。250先令的接種環 科克艾斯維爾 MD 21030 Difco實驗室（地址見上）或美國oxoid有限公司9017 紅牌路 哥倫比亞 MD 21045
13.5連續和精確的測試需要純的、無污染的、非突變體的測試培養基。
為了防止污染使用優良的消毒技術對培養皿和轉移物件進行消毒。為了避免物種突變，要嚴格遵守每月更換。通過定期制作肉塊載物片來檢測培養基并觀測菌落的特征類型情況。
13.6 在和織物的接觸期，如果需要穩定態的培養基，就要事先準備測試菌的稀釋溶液即0.85%的鹽水和適當的緩釋處理液。
13.7在稀釋溶劑中加入表面活性劑能提高疏水織物纖維的潤濕性，但這種表面活性劑會導致細菌的數量減少。通過前面的試驗來確定使用的濃度，記錄活性劑的作用和濃度。
13.8如果用消毒蒸餾水來代替中性溶液，殺生物劑將有可能被帶走。
13.9 Peeler.J.T Leslie J.W. Messer.J.W 復制計算錯誤分析和細菌菌落計算 J.Food Protection vol.45. 1982 238～240頁。